Ficoll密度梯度离心法是利用不同颗粒之间存在沉降系数差,在一定离心力作用下,颗粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同区域上形成区带。Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体,中性,平均分子量,当密度为1.2g/mL,未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜,故常用作PBMC分离的分离液。
Ficoll密度梯度离心法的实例
根据血液中各成分比重的不同:红细胞中性粒细胞淋巴细胞单核细胞血浆(包括血小板),用Ficoll-Paque单核细胞分离液(相对密度为1.±0.,介于中性粒细胞与淋巴细胞之间)将脐血细胞分成不同的层次。
由于红细胞、粒细胞比重大,离心后沉于管底;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重,离心后漂浮于分层液的液面上,也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞,就可从外周血中分离到单个核细胞。
Ficoll密度梯度离心法的特点
Ficoll密度梯度离心法是一种单次密度梯度离心分离法。聚蔗糖-泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液,其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物称聚蔗糖(商品名为Ficoll),分子量为40kD,具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓度的Ficoll溶液粘性高,易使细胞聚集,故通常使用60g/L的低浓度溶液,密度为1.,
淋巴细胞分离液
淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。
分离原理:外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,淋巴细胞分离液是一种密度介于1.~1.之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。